产品目录

羟脯氨酸在胶原蛋白中占13.4%，在弹性蛋白中占极少量，其它蛋白中均不存在。而胶原蛋白大多分布在皮肤、腱、软骨、血管等处，因此羟脯氨酸的量能反映结缔组织疾病的胶原代谢情况。

有人把皮肤中羟脯氨酸的测定作为筛选抗衰老药物的一个指标。在发育阶段随年龄的增长，其羟脯氨酸在尿中排泄增加，而发育停止后稳定。老年人的羟脯氨酸比年轻人要少。

鼠患有自发性高血压及继发性高血压时，尿中羟脯氨酸含量增加。

手术创伤会导致尿羟脯氨酸排泄量的增加，因高脂、低蛋白、酒精中毒及毒物、营养不良，或肝细胞变性坏死，通过炎症使纤维增加，分割肝小叶，导致肝硬化。肝纤维化时，肝内主要增加的成分为胶原纤维，羟脯氨酸为胶原纤维所特有，测定肝羟脯氨酸的含量，可换算成肝胶原蛋白的含量，以反映肝纤维化程度。胶原纤维分解主要依赖胶原酶和其它蛋白酶的作用，其分解产物羟脯氨酸从尿中排出，测定尿羟脯氨酸的含量，可反应胶原降解的情况。通过测定组织及尿中羟脯氨酸的含量，一方面可以判断纤维化程度，同时可以筛选预防与治疗的药物。

• 试剂一应用液：
  临用时将粉剂一瓶，先加甲液10mL充分溶解（从瓶口向内看，完全溶解完）。然后再加乙液20mL充分混匀。配好后的试剂4℃～8℃冰箱保存3个月。
  注：粉剂加甲液10mL后一定要完全溶解后才能加乙液。
  
• 试剂三应用液：
  临用时将粉剂一支加到30mL溶剂中充分溶解，配好后4℃冰箱避光保存1个月。
  
• 100μg/mL标准贮备液：
  测试前将一支标准品用双蒸水溶解后定容至50mL，配成100μg/mL的标准贮备液，4℃冰箱保存2周。
  
• 5μg/mL标准应用液：
  取100μg/mL的标准贮备液1mL加双蒸水定容至20mL，配成5μg/mL的标准应用液，现用现配。

• 样本前处理试剂：
  
  • 指示剂5mL×1瓶
    
  • PH调整甲液100mL×1瓶
    
  • PH调整乙液20mL×1瓶
    
  • 活性炭×1袋
• 样本前处理：
  
  • 组织样本水解：准确称取组织80～100mg，剪碎，加6mol/l HCL1mL，放磨口试管中加盖，95℃或者沸水浴水解5小时，也可放100℃烤箱中水解5小时。6mol/L HCL的配制：浓HCl为12mol/L，与水1∶1稀释为6mol/L
    
  • 水解液调PH值至6.0～6.8。
    ①、流水冷却后各管加指示剂10μL，摇匀；
    ②、各管加入调PH甲液1.5mL，混匀；
    ③、各管加入调PH乙液0.2mL，混匀，并用PH试纸测PH，（大约在5～6之间）；
    ④、各管逐滴小心加入乙液，每滴加入后均要混匀，直至液体中指示剂的颜色变成黄绿色。此时PH值在6.0～6.8左右；
    ⑤、然后加双蒸水至10mL，混匀。
    ⑥、取3～4mL稀释的检测液加适量活性炭（约20～30mg左右，以上清液离心后澄清无色为准），混匀，3500转/分离心10分钟，小心取上清1mL作检测。
    注1：如果您的组织样本量很少，则可以从称重、水解、调PH均按比例减少，不影响结果。
    注2：每次混匀时可用塑料薄膜或冰箱保鲜膜压住试管口，充分旋涡混匀。
• 操作表：
  

  成分	空白管	标准管	测定管
  双蒸水(mL)	1
  5μg/mL标准应用液(mL)		1
  检测液(mL)			1
  试剂一应用液(mL)	0.5	0.5	0.5
  混匀，静置10分钟
  试剂二(mL)	0.5	0.5	0.5
  混匀，静置5分钟
  试剂三应用液(mL)	0.5	0.5	0.5
  混匀，60℃水浴15分钟，冷却后，3500转/分离心10分钟，取上清在550nm处，1cm光径，双蒸水调零，测各管吸光度。

  
  
• 计算公式：
  

  羟脯氨酸含量 (μg/mg组织)	＝	A测定－A空白	×C标准×	V水解液
  		A标准－A空白		W

  
  C_标准：标准液浓度，5μg/mL;
  V_水解液：水解液总体积，10mL;
  W：样本鲜重，mg。