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羟脯氨酸在氧化剂的作用下所产生的氧化产物与二甲氨基苯甲醛作用呈现紫红色，根据其呈色的深浅可推算出其含量。

羟脯氨酸在胶原蛋白中占13.4%，在弹性蛋白中占极少量，其它蛋白中均不存在。而胶原蛋白大多分布在皮肤、腱、软骨、血管等处，因此羟脯氨酸的量能反映结缔组织疾病的胶原代谢情况。

有人把皮肤中羟脯氨酸的测定作为筛选抗衰老药物的一个指标。在发育阶段随年龄的增长，其羟脯氨酸在尿中排泄增加，而发育停止后稳定。老年人的羟脯氨酸比年轻人要少。

鼠患有自发性高血压及继发性高血压时，尿中羟脯氨酸含量增加。

手术创伤会导致尿羟脯氨酸排泄量的增加，因高脂、低蛋白、酒精中毒及毒物、营养不良，或肝细胞变性坏死，通过炎症使纤维增加，分割肝小叶，导致肝硬化。肝纤维化时，肝内主要增加的成分为胶原纤维，羟脯氨酸为胶原纤维所特有，测定肝羟脯氨酸的含量，可换算成肝胶原蛋白的含量，以反映肝纤维化程度。胶原纤维分解主要依赖胶原酶和其它蛋白酶的作用，其分解产物羟脯氨酸从尿中排出，测定尿羟脯氨酸的含量，可反应胶原降解的情况。通过测定组织及尿中羟脯氨酸的含量，一方面可以判断纤维化程度，同时可以筛选预防与治疗的药物。

• 试剂一应用液：
  临用时将粉剂一瓶，先加甲液10mL充分溶解（从瓶口向内看，完全溶解完）。然后再加乙液20mL充分混匀。配好后的试剂4℃～8℃冰箱保存3个月。
  
  • 粉剂加甲液10mL后一定要完全溶解后才能加乙液。
• 试剂三应用液：
  临用时将粉剂一支加到30mL溶剂中充分溶解，配好后4℃冰箱避光保存1个月。
  
• 100μg/mL标准贮备液：
  测试前将一支标准品用双蒸水溶解后定容至50mL，配成100μg/mL的标准贮备液，4℃冰箱保存2周。
  
• 5μg/mL标准应用液：
  取100μg/mL的标准贮备液1mL加双蒸水定容至20mL，配成5μg/mL的标准应用液，现用现配。

• 样本前处理：
  
  • 样本水解：准确称取样本80～100mg，剪碎，加1mL的6M盐酸，放磨口试管中加盖，95℃或者沸水浴水解5小时，也可放100℃烤箱中水解5小时。
    
    • 6M盐酸的配制：浓HCl为12M，与水1∶1稀释为6M。
  • 水解液调pH值至6.0～6.8。
    
    • 流水冷却后各管加指示剂10μL，摇匀；
      
    • 各管加入调pH甲液1.5mL，混匀；
      
    • 各管加入调pH乙液0.2mL，混匀，并用pH试纸测pH，（大约在5～6之间）；
      
    • 各管逐滴小心加入乙液，每滴加入后均要混匀，直至液体中指示剂变成黄绿色。此时pH值在6.0～6.8左右；
      
    • 然后加双蒸水至10mL，混匀。
      
    • 取3～4mL稀释的检测液加适量活性炭（约20～30mg左右，以上清液离心后澄清无色为准），混匀，3500转/分离心10分钟，小心取上清1mL作检测。
    • 如果您的组织样本量很少，则可以从称重、水解、调PH均按比例减少，不影响结果。
      
    • 每次混匀时可用塑料薄膜或冰箱保鲜膜压住试管口，充分旋涡混匀。
• 操作表：
  

  成分(mL)	空白管	标准管	测定管
  双蒸水	1
  5μg/mL标准应用液		1
  检测液			1
  试剂一应用液	0.5	0.5	0.5
  混匀，静置10分钟
  试剂二	0.5	0.5	0.5
  混匀，静置5分钟
  试剂三应用液	0.5	0.5	0.5
  混匀，60℃水浴15分钟，冷却后，3500转/分离心10分钟，取上清在550nm处，1cm光径，双蒸水调零，测各管吸光度。

  
  
• 计算公式：
  

  羟脯氨酸含量 (μg/mg组织)	＝	A测定－A空白	×C标准×	V水解液
  		A标准－A空白		W

  
  C_标准：标准液浓度，5μg/mL;
  V_水解液：水解液总体积，10mL;
  W：样本鲜重，mg。